叶酸有促进骨髓中幼细胞成熟的作用，摄入不足、吸收障碍、需求增加、药物影响、先天因素等均可导致叶酸缺乏，诱发巨幼细胞贫血。

1、摄入不足：叶酸每天的需要量为200-400µg。人体内叶酸的储存量仅够4个月之需。食物中缺少新鲜蔬菜、常见于营养不良、偏食、挑食或喂养不当的婴幼儿中。叶酸衍生物不耐热，过度烹煮或腌制均可使叶酸破坏引起摄入不足。

2、吸收障碍：影响空肠黏膜吸收的各类疾病如短肠综合征、肿瘤、手术切除及热带性口炎性腹泻均可导致叶酸的吸收不足。

3、需求增加：婴幼儿以及慢性反复溶血、白血病、肿瘤、甲状腺功能亢进及血液透析治疗的患者，叶酸的需求都会增加，如补充不足就可发生叶酸缺乏，妊娠时尤其是最初3个月，叶酸需要量可增加5～10倍，更应注意补充。

4、药物影响：甲氨蝶呤、苯妥英钠、苯巴比妥、抗惊厥药、磺胺嘧啶、氨甲蝶呤、口服避孕药、氟尿嘧啶阿糖胞苷、异烟肼、乙胺嘧啶、环丝氨酸等药物可影响叶酸的吸收和代谢。

5、先天因素：某些先天性物质的缺乏也可造成也算缺乏，如先天性缺乏5，10-甲酰基四氢叶酸还原酶患者。